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淺析紫外分光光度計測定蛋白質含量原理
來源:http://www.rolypigusa.com/   作者:紫外可見分光光度計    更新日期:2014-11-20 10:25:41   

      紫外分光光度計測定蛋白質含量原理是為了學習紫外分光光度法測定蛋白質含量的原理。掌握紫外分光光度法測定蛋白質含量的實驗技術。掌握TU-1901紫外可見分光光度計的使用方法並了解此儀器的主要構造。
   
紫外可見分光光度計實驗原理是以溶液中物質的分子或離子對紫外和可見光譜區輻射能的選擇性吸收為基礎而建立起來的一類分析方法。紫外光:10-400 nm,可見光:400-780 nm(可被人們的眼睛所感覺),特點:帶光譜、分子光譜。

淺析紫外分光光度計測定蛋白質含量原理

    實驗步驟

一,啟動計算機,打開主機電源開關,啟動工作站並初始化儀器,預熱半小時。用吸量管分別吸取0.6、0.8、1.0、1.2、1.4mL 5.00 mg/mL標準蛋白質溶液於5隻10 mL 比色管中,用0.9% NaCl溶液稀釋至刻度,搖勻。用1 cm石英比色皿,以0.9%NaCl溶液為參比(參比溶液不可取出)。在工作界麵上選擇測量項目為光譜掃描,設置掃描參數(起點:400nm,終點:250nm,速度:中,間隔:1.0nm,單次掃描)。將兩個均裝有0.9%NaCl溶液的1cm石英比色皿放入測量池中,進行基線掃描,然後選定量測定,校零,在調回光譜掃描。
   
二,吸收曲線的製作:(找出最大吸收波長);將放在前麵的比色皿中溶液換為0.3 mg/mL的蛋白質溶液,點擊START進行掃描,得到如下吸收曲線,從曲線中龍門娛樂可以看出此標準蛋白質溶液的最大吸收波長為278nm,此波長下的吸光度為0.1984。
   
三,標準曲線的製作;在工作界麵上選擇測量項目為光度測量設置測量條件(測量波長:278.00 nm)。用1 cm石英比色皿,以0.9%NaCl溶液為參比,在278nm處分別測定以上所配標準溶液的吸光度A278,以蛋白質濃度為橫坐標,吸光度為縱坐標繪製標準曲線:
   
四,樣品測定;配製三份待測蛋白質溶液,(取待測蛋白質溶液2.0mL分別於3隻10mL 比色管中,用0.9% NaCl溶液稀釋至刻度)按上述方法測定278 nm處的吸光度。得吸光度依次為0.3906,0.3765,0.3848。平均值為A278=0.3840,根據樣品溶液的吸光度,從標準曲線上查出待測蛋白質的濃度為0.6101mg/mL。轉換後待測蛋白質溶液的濃度為C= 0.6101mg/mL ?10 mL /2.0mL=3.0505mg/mL。
   
五,注意事項;準備工作:在測量前應把機器預熱半小時。溶液一定要配製準確,以防影響實驗效果,保證點在一條直線上。由於蛋白質的紫外吸收峰常因PH值的改變而改變,故進行樣品測定時的PH最好與標準曲線製作時的PH值一致。測量工作:吸收曲線繪製前必須進行光譜的掃描。在作標準曲線進行定量前一定要選擇最大的吸收波長,確保靈敏度高。在實際操作中,比色皿在使用中應注意保持幹淨,更不能觸摸比色皿的光麵,以防摩擦影響通光。
   
 龍門娛樂是專業提供分光光度計、紫外分光光度計、可見分光光度計、紫外可見分光光度計、超微量分光光度計等光譜分析儀器和實驗室儀器的研發、生產、銷售、服務於一體的高新技術企業,在研發高起點、管理現代化、市場全球化的發展戰略的指引下,將龍門娛樂十幾年豐富的產品設計、製造經驗,和多家國際知名分光光度計型號和品牌產品的優點相結合,使龍門娛樂得以迅速立足於國內市場,並逐漸向國際市場發展。
  

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