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分子熒光光譜法測定維生素B2的含量
來源:http://www.rolypigusa.com/   作者:紫外可見分光光度計    更新日期:2016-09-30 11:14:26   
摘要:分子熒光光譜法測定維生素B2的含量。

分子熒光光譜法測定維生素B2的含量

A. 實驗原理
常溫下,處於基態的分子吸收一定的紫外—可見光的輻射能成為激發態分子,激發態分子通過無輻射躍遷至第一激發態的最低振動能級,再以輻射躍遷的形式回到基態,發出比吸收光波長長的光而產生熒光。固定一個假設的發射波長進行激發波長掃描,找出最大激發波長λex,然後固定最大激發光波長λex進行熒光發射波長掃描,找出最大發射波長λem。最大激發波長和最大發射波長的選擇是本實驗的關鍵。
在稀溶液中,熒光強度與物質的濃度呈線性關係。由於熒光物質具有猝滅效應,此方法僅適用於痕量物質分析。
維生素B2也稱核黃素,是橘黃色無臭的針狀結晶。易溶於水,而不溶於乙醚等有機劑。光照易分解,對熱穩定,在中性或酸性溶液中穩定,在堿性溶液中較易被破壞。維生素B2水溶液在430~440 nm藍光或紫外光照射下會發出綠色熒光,熒光峰在525 nm附近,在pH為6-7的溶液中熒光強度最大。最大激發波長λex=465 nm,最大發射波長λem=520 nm。pH=11時,熒光消失。維生素B2在水溶液中穩定。在稀溶液中,其熒光度與維生素B2溶液濃度呈線性關係。
維生素B2在堿性溶液中經光線照射會發生分解而轉化為另一物質光黃素,光黃素也能發出熒光,其熒光強度比維生素B2強,所以測量維牛素B2的熒光時要控製在酸性和避光條件下進行。
B. 儀器、試劑
1.儀器
RF-530IPC熒光分光光度計;電子天平
移液管(2 mL);棕色容量瓶(50 mL、1000 mL)。
2.試劑
維生素B2;冰醋酸(分析純);多維葡萄糖粉(含有維生素Bi、維生素B2、維生素C、維生素D和葡萄糖)。
3.標準溶液的配製
維生素B2標準儲備液(10μg·mL^-1):準確稱取10.0 mg維生素B2,用熱去離子水溶解後,轉入1000 mL棕色容量瓶中,冷卻後加去離子水至刻度,搖勻,置於暗處冰箱內保存。
C. 實驗步驟(略)
D. 注意事項
(1)吸量管、容量瓶的正確使用及移液、守容須規範操作,配製標準溶液時,為了減少誤差,取不同體積的同種溶液應用同一移液管。
(2)使用熒光分光光度計時,須按照既定程序進行。在測定係列濃度標準溶液的熒光強度時,必須按濃度由低到高的順序放入測定。
(3)因為熒光是從石英池下部通過,所以拿取石英池時,應用手指捏住池體的上部,不能接觸下部。清洗樣品池後,應先用吸水紙吸幹四個麵的液滴,再用擦鏡紙往同一方向輕輕擦拭。
(4)在測試樣品時,府灃煮樣品的濃府不能太高,否則由於存在熒光猝滅效應,樣品濃度與熒光強度不呈線性關係,造成定量工作出現誤差。

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