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熒光光譜的校正
來源:http://www.rolypigusa.com/   作者:紫外可見分光光度計    更新日期:2014-11-20 20:47:40   
摘要:熒光分析儀使用的好壞除了與熒光分析儀自身的性能密切相關外,儀器的調試工作也起到了決定性作用。因儀器調試工作不到位,測定數據偏差大而無法使用的例子在現實中也時有發生。

熒光光譜的校正

熒光分析儀使用的好壞除了與熒光分析儀自身的性能密切相關外,儀器的調試工作也起到了決定性作用。因儀器調試工作不到位,測定數據偏差大而無法使用的例子在現實中也時有發生。
由於激發光源在不同波長處發射的光子數存在差異,單色器對各種波長光線的射率也不盡相同,且與偏振光有關的檢測器(如PMT)對各種波長的檢測效率不一樣。而熒光光譜是測定各個不同波長下的熒光體的熒光強度,這些光學部件的光譜特性的差異無法通過扣除空白溶液的方法消除,所以需要對熒光光譜進行校正。
(1)激發光譜的校正    以羅丹明B光量子計數器來校正。首先校正零點;然後把羅丹明B-乙醇溶液( 3g/L)盛人石英三角池,用量為充滿石英三角池的2/3積。將其置人樣品室,加入高通濾光片濾去雜散光,僅讓630nm熒光通過。固定發射波長在630nm,掃描激發單色器(激發掃描的範圍從198. 6-601. 4nm),將檢測到的信號保存到計算機軟件上並進行歸一化,得到激發光強度與波長的關係,應為一條與波長無關的直線。移去石英三角池與濾光片,放入分析試樣進行激光譜掃描,即可得到樣品已校正的激發光譜。激發波長200一600nm範圍內,都可以用此法校正。
(2)發射光譜的校正  在校正完激發光譜後(激發光強度已與波長無關),把擴散體放人樣品室,發射波長設定為198. 6nm,然後進行激發單色器、發射單色器同波長的同步掃描(掃描的範圍從198. 6~601. 4nm),將測得的信號保存到計算機軟件上並歸一化,歸一化後的輸出信號應為一條與波長無關的直線。移去擴散體,放入試樣進行發射光譜掃描,即可得到樣品已校正的發射光譜。發射波長200~600nm範圍內,都可以用此法校正。
(3)長波長發射光譜的校正  需校正的發射波長處於長波長區600nm甚至更,副標準光源作為燈源,用它來校正發射光譜的範圍在發射波長處於soo-OOnm範圍內。,將副標準光源和擴散體放在樣品倉內,預熱5min,然後進行發射掃描(掃描的範圍從498. 6~901. 4nm),移去副標準光源與擴散體,放人試樣進行發射光譜掃描,即可得到樣品已校正的發射光譜。
(4)長波長激發光譜的校正  在校正完長波長發射光譜後,校正零點,將擴散體放在樣品倉內,然後進行激發掃描(掃描的範圍從498. 6~901. 4nm),移去擴體,放人試樣進行激發光譜掃描,即可得到樣品已校正的激發光譜。激發波長500~900nm範圍內,都可以用此法校正。
現在某些型號的商品熒光儀在出廠時已經將激發光譜與發射光譜的校正圖儲存在軟件中,用戶在測試時可以根據測試需要直接調出來進行譜圖校正,更加簡便快速。

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